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SD大鼠偏侧帕金森病模型差异表达cDNA文库的构建
作者: 张伟 邱克军 杨辉
单位:第三军医大学新桥医院神经外科,
关键词: 帕金森病 cDNA文库 差异表达 SD大鼠
分类号:
出版年·卷·期(页码):2007·33·第 4 期(0-0)
摘要:
背景帕金森病(Parkinson's disease,PD)是好发于中老年人的神经退行性疾病,随着社会的老龄化,其患病率及致残率呈上升趋势。根据流行病学调查,神经病理学研究及基因水平分析,一般认为PD的病因及其病理损伤过程是多因素的,包括遗传因素、环境毒素、氧化应激、兴奋性氨基酸毒性作用、线粒体功能障碍、细胞凋亡和神经营养因子水平降低等。对疾病分子水平变化的研究,不但为阐明疾病的发生发展提供新的资料,而且还能为其治疗开辟新的途径。然而目前对PD分子水平所知尚少,因此,揭示PD分子病理变化,具有十分重要的意义。本研究旨在构建偏侧帕金森病SD大鼠纹状体组织差异表达基因消减cDNA文库,并筛选出一些可能参与PD病理损伤过程的基因,为PD的基因治疗提供依据。方法行SD大鼠纹状体区立体定向注射6-OHDA制备偏侧帕金森病模型;用抑制消减杂交方法分离差异表达基因的cDNA片段,连接T载体构建文库,转化扩增后随机挑取白色克隆行菌落PCR鉴定;利用反Northern杂交对重组质粒进行筛选;通过序列测定后与Genebank进行同源性比较。结果消减文库扩增获得1500余个白色阳性克隆,随机挑取95个行PCR扩增,81%的克隆中有100~600bp的插入片段,经反Northern杂交筛选出12个差异表达基因。结论利用立体定向技术成功制备偏侧帕金森病SD大鼠模型;利用SSH法及T/A克隆技术成功构建偏侧帕金森病大鼠纹状体组织差异表达基因消减cDNA文库。
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